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细胞生长曲线的测定

产品介绍

[细胞生长曲线的测定实验目的]掌握绘制细胞生长曲线的原理和方法。

[细胞生长曲线的测定背景与原理]

生长曲线是则定细胞生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一 般细胞传代之后,经过短暂的悬浮后贴壁,随后渡过长短不同的潜伏期,即进入快速生长的指数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入平台期,然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化,需连续对细胞进行计数。通常计数6天。一般每次实验设3个平行重复。

[材料、试剂与仪器]

1、实验材料:

Hela细胞系。

2、实验试剂:

DMEM培养基(青霉素,链霉素,10%血清),0.25%胰蛋白酶溶液,台酚蓝染液。

3、实验仪器:

超净工作台,cO2培养箱,倒置显微镜,微量移液器,血细胞计数板,培养瓶,高心管,移液管,废液缸,盖玻片,24孔板。

[方法与步骤]

1、取生长良好的细胞,用培养基制成细胞悬液后计数。根据细胞计数结果按5x104mL作传代培养接种于24孔板中,共接种21孔细胞。1 ml孔。余下三孔可设传代培养的对照。

2、24h后每天记录细胞数目,每次取3孔细胞,分别进行计数。计算平均值。连续计数7d。细胞用胰酶消化后加入一一定量的培养基,混匀制成细胞悬液。取少量悬液与台酚蓝11混合。取一-干净的血细胞计数板,盖上盖片,从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。注意滴液勿有气泡,也不能太多,否则会使盖片浮起而使细胞计数不准。

3、低倍镜下观察,活细胞不着色,台盼蓝着色的细胞呈深蓝色,是不健康或已死亡的细胞,不能计数。找出计数板上的方格,计算四角大格内总细胞数,压大格线者只计左侧和上方,不计右侧和下方细胞悬液中细胞密度计算公式为:细胞数1(L= (四角大格内细胞数/4) x104x2

4、根据细胞计数结果,以单位细胞数(细胞数mL)为纵坐标,以时间为横坐标绘制生长曲线。
 

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