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细胞周期实验外包检测

产品介绍

  细胞周期实验外包检测是细胞实验平台常见实验之一,也是剑钝项目组成之一,由经验丰富的实验人员进行操作。
 
  本公司实验过程所用试剂,全部为进口试剂,已实验的准备性。
 
  细胞周期检测的原理:
  PI法是经典的周期检测方法,PI是碘化丙啶(Propidium),一种双链DNA的荧光染料,碘化丙啶和双链DNA结合后可产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,然后根据DNA含量的分布情况,可进行细胞周期和细胞凋亡分析。
  通常正常细胞的G0/G1期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),G2/M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA
  含量介于2N和4N之间。细胞用冰乙醇固定通透后,PI可以与细胞的DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。
  因此,可以通过流式细胞内DNA含量进行检测,将细胞周期区分为G1/G0期,S期和G2/M期,并可得出各个时期细胞百分数。
 
  细胞周期检测实验流程:
  1.收集细胞:A:收集细胞5~20×105于离心管中,若细胞比较小(如淋巴细胞)400g离心,若细胞比较大(如肿瘤细胞)300g离心,5~10min,弃去培养液;
  2.洗涤:加入1ml冷PBS(提前放4℃预冷)洗涤1次,离心弃去上清;
  3.固定前处理:利用管底残留的液体,轻弹管底,将沉淀重悬成细胞悬液,避免细胞成团;
  4.细胞固定:加入约1ml-20℃预冷的无水乙醇中,轻轻吹打混匀,-20℃固定1h或过夜;
  5.洗涤:加入1ml冷PBS(提前放4℃预冷)洗涤1次,300g离心10min,弃去上清;
  6.RNA酶消化:300g离心5min,吸尽上清后,加入100μL的RNaseA并充分悬浮细胞,37°C水浴30min。
  7.PI染色:加入400μL的PI溶液并充分混匀,4℃避光孵育30 min;
  8.上机检测:用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光,低速获取细胞,采用分析软件进行DNA含量分析。

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