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基尔顿原位杂交

产品介绍

基尔顿原位杂交

原位杂交反应(以DIG-cDNA探针为例):

1、切片常规脱蜡至水,脱蜡前,将组织切片置于60℃恒温箱中烘烤60min;

2、30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温10min以灭活内源性酶,蒸馏水洗3次;

3、暴露mRNA核酸片段,切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶,37℃消化30min,PBS洗5min X3,蒸馏水洗1次;

4、预杂交,湿盒准备——干的杂交盒底部加20%甘油以保持湿度。按每张20uL加杂交液。恒温箱40℃ 2h,吸取多余液体;

5、杂交,按每张切片20uL探针杂交液,加在切片上。将盖玻片盖在切片上,蜡蟆封盖,恒温箱42℃杂交;

6、杂交后洗涤,去除蜡膜,揭掉盖玻片,37℃ 2XSSC洗5min X2;37℃ 0.5XSSC洗15min X1;37℃ 0.2XSSC洗15min X1;

7、滴加封闭液,37℃ 30min;

8、滴加生物素化鼠抗地-高-辛,37℃ 60min,PBS洗5min X4;

9、滴加SABC,37℃ 30min,PBS洗5min X3;

10、滴加生物素化过氧化酶,37℃ 30min,PBS洗5min X4;

11、DAB显色,使用DAB显色试剂盒,显色10min左右,显色后充分水洗;

12、苏木素复染,水洗返蓝;

13、酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片;

14,显微镜下观察拍照。

基尔顿原位杂交

客户提供:

1. 组织样本材料要新鲜,组织离体后应立即投入固定液(10%中性甲醛、4%多聚甲醛,)中;

2. 细胞样本离心后弃去上清液加入3%戊二醛固定液;

3. 石蜡切片,冰冻切片以及细胞爬片,涂片等请按照温度要求运输、储存。

提交的产品和资料:

1. 杂交后的切片;

2. 每张切片提供一张照片;

3. 实验报告

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