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质粒抽提实验外包

产品介绍

    选方法是碱裂解法。如果有问题,或者是大质粒 (>15 kb),则用温和的方法 SDS 裂解法。详细情况见“分子克隆”。试剂盒都使用碱裂解法,所以都有一个通病,抽提大质粒时效果不好。

    质粒抽提实验外包常用的方法是碱裂解法,它具有得率高,适用面广,快速,纯度高等特点。关于碱裂解法的原理,复旦大学生化与分子生物学实验室的有一篇专论,大家可以去看一下。这是一篇美文,非常有趣。文中提到了一个与能查到的资料不同的观点,也是非常有启发的。

    当然,碱裂解法相对质粒抽提实验外包也有缺陷:容易导致不可逆的变性;不适合大。碱裂解法是很剧烈的方法,质粒在碱性条件下会变性,时间一长,这种变性就成为不可逆的了 (电泳时在超螺旋前面一点点,如果有一条带,就是此变性的质粒。)。所以,要降低不可逆的变性,就要控制好碱裂解的时间。 (似乎可以做这么一个推理:在碱性条件下,质粒的两条链从一点或者几个点开始分开,随着时间的延长,直到分开。理论上讲,分开的两条链要很快地配对复性,而没有分开的两条链却可能 配对复性。) 碱裂解法不适合大,原因也是因为该方法太剧烈,使超螺旋比例较低。文献推荐的抽提大质粒的方法是温和得多的方法,缺点是得率要低一些。现在得问题是,大质粒的拷贝数本来就低,如果抽提方法得率再不高的话,抽提起来就很费力了。如果注意到在碱裂解法中,超螺旋比例随着碱裂解时间的延长而降低,随着粘稠度的增加而减低这个现象,可以使用碱裂解法来抽提大质粒的:增加试剂的使用量,使加入 NaOH/SDS 液后,溶液在 1 分钟内就能变得很清澈;立即加入中和试剂。这个实验我们没有做过,但 QIAGEN 抽提大质粒用的就是碱裂解法。

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