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TA克隆实验外包

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TA克隆实验外包

TA克隆实验外包方法(TA Cloning):把PCR片断与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性,通常在3加上A。例如:Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产物的3端自动添加一个3-A突出端。只有用经过特殊处理的具有3-T突出末端的DNA的片断才能通过T/A配对进行连接。

通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法,重组到T-载体中,通过序列测定清楚DNA序列。由于在PCR过程中,使用的DNA聚合酶不同,往往分为2种情况:(1)使用不同的Taq酶,在PCR扩增循环结束后,加上72℃ 10分钟一个过程,Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A,因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。(2)使用高保真的DNA聚合酶,如pfu酶,由于其不能在扩增产物的3末端加上A,得到的DNA序列为钝端,因此,需要在回收纯化后进行加A的过程,通常是以PCR回收产物为模板,加上量的普通Taq酶和反应液,加入dATP(或dNTP),72℃10分钟,然后将加A产物直接用于TA连接。

实验材料要求:未纯化的PCR产物及PCR电泳图片,PCR扩增引物序列PCR扩增用酶,如果使用含3'→5'外切酶活性的聚合酶,请提供PCR引物,我们将重新扩增PCR产物以能进行TA克隆操作。

服务说明 
1、PCR产物TA克隆实验中,PCR片段越大,TA克隆难度越大;2、TA克隆实验中,我们使用的是大家常用 T载体作为标准T载体,如果对载体有特殊要求,请再实验之前告知客户服务人员。

如果您对我们的感兴趣或有疑问,

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