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杂交瘤细胞抗CD2 35.1细胞

产品介绍

杂交瘤细胞抗CD2 35.1细胞

杂交瘤细胞抗CD2 35.1细胞增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。请按照正确的培养方法来解冻、传代,以此细胞具备良好的增殖能力,方便您的后继研究顺利进行。

质量控制:  

本细胞经过了检测,不含有细菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原体。

培养条件:37℃,5% CO2,PH值7.2~7.4,无菌恒温培养。

用途: 本产品只提供给进一步的科研使用,不可应用于治疗等其他方面。

复苏

1.37°C水浴预热培养基(RPMI1640+10% FBS);

2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续暖细胞);

3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;

4.弃上清,加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中,轻轻晃匀;

5.置于37°C,5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧);

6.第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

细胞传代

1.当细胞融合度达到90%以上时,给细胞传代;

2.37°C水浴预热培养基(RPMI1640+10% FBS);

3.在超净台中,弃培养基,加入2-5mlPBS清洗细胞后,再加入1ml胰酶消化细胞;

4.显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时,加入5ml培养基(RPMI1640+10% FBS)终止消化;

5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散;

6.将细胞移入离心管中,1000rpm离心5min;

7.弃上清,加入15-20ml的培养基(含血清)重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中(细胞贴壁后融合度在25-50%之间),细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混匀细胞悬液,细胞均匀分布;

8.将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养。

细胞冻存

1.37°C水浴预热培养基(RPMI1640+10% FBS);

2.消化细胞后给细胞计数:

1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片,将盖玻片覆盖计数区;

2)充分混匀细胞,取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合,移液器吹吸混合均匀,用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞,以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳;

3)显微镜下,数四个计数区的总细胞数,无活性细胞染成蓝色,活细胞不被染色;

4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2;

这里10000是不变的,因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3计数池内,1cm3=1ml,将四个计数区的细胞数除以4取平均数,乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。

5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×。

 

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