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细胞增殖与毒性MTT检测

产品介绍

细胞增殖与毒性MTT检测

项目简介:
四甲基偶氮唑盐比色法(MTT方法),是通过快速简便的颜色反应来检测细胞存活数量。其原理是MTT可作为哺乳类动物细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时,线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色的针状甲月替(Formazan)结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其吸光度OD值,OD值的高低可间接反映活细胞的数量及其活性。
 
  目前
细胞增殖与毒性MTT检测常用于以下几个方面的研究:
  1、检测细胞活性:常作为细胞毒性试验的一种方法。
  2、体外药物敏感实验:该方法简便、经济、快速,重复性好,所需的细胞数较少,没有放射性,目前广泛的用于临床前的抗癌药物的筛选研究。
  3、一些细胞因子活性的研究
 
主要实验步骤如下:
     1)将对数生长期细胞用胰酶消化后配制成浓度为1-10×104个/ml的细胞悬液,按1000-10000个细胞/孔接种于96孔板,每孔加100μl。
     2)将平板置37℃、5%CO2湿度培养箱中24小时后,加入含有不同浓度受试样本的培养液100μl,每个样本不同浓度设平行的三个孔,对照组加不含样本的培养液100μl,再放入培养箱中孵育24-72小时,
      3)用快速翻板法倒掉培养液,每孔加入用无血清1640按5mg/ml新鲜配制的MTT溶液100μl,温育4小时,使MTT还原为甲月替,再次倒掉上清液,每孔加DMSO(二甲基亚枫)200μl,用平板摇床摇匀后,使用酶标仪测定光密度值(OD)(参考波长450nm,检测波长570nm),以溶剂对照处理细胞为对照组。
 
服务内容:用于判断药物、外源性基因、小RNA、蛋白、抗体、细胞因子、
血清等对于细胞的作用,以明确上述因子对于细胞生物学行为的影响(如细胞活力、增殖、凋亡等方面)。
服务周期:视实验设计而定,一般为5-10个工作日
结果提供:结果报告、代表性图片,操作流程及相关试剂仪器信息。
样本提供需知:
1)客户提供实验分组情况及实验背景资料,有具体要求请事先说明;
2)客户检测细胞或我们负责提供,请咨询公司以明确是否有该细胞株,
3)干预药物由客户提供,如无则由双方协商公司代购;
4)标本收集与保存:
一般情况下由公司实验室负责准备检测样本,客户提供细胞或我们负责提供细胞;
5)细胞样本运输:
如客户提供细胞进行试验,可选择以下寄送方式
细胞样本以干冰运输;
细胞样本直接寄送培养瓶(密封不污染、培养液不漏出);

 

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