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细胞增殖与毒性MTT的检测

产品介绍

细胞增殖与毒性MTT的检测

      提供原代细胞培养、传代细胞培养以及细胞模型建立等多种细胞学实验方案,如药物干预、小RNA干扰、表达载体转入细胞等,同时提供下游检测,包括免疫蛋白印迹WB、免疫沉淀IP、免疫细胞化学、免疫荧光、RT-PCR、荧光定量PCR、ELSIA检测和细胞增殖与毒性MTT检测、细胞迁移、细胞侵袭、凋亡检测、流式细胞术FCM检测等。

细胞增殖与毒性MTT的检测
      成功培养的原代细胞如大鼠间充质干细胞、小鼠zigong平滑肌细胞、人皮肤成纤维细胞、人支气管上皮细胞、大鼠zigong内膜细胞等,具有丰富的原代细胞培养操作经验。公司实验室拥有100多种常用细胞株,可随时为你提供低价质优的细胞。

 

    原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
MTT方法用于判断药物、外源性基因、小RNA、蛋白、抗体、细胞因子、血清等对于细胞的作用,以明确上述因子对于细胞生物学行为的影响(如细胞活力、增殖、凋亡等方面)。

 

    主要实验步骤如下:
     1)将对数生长期细胞用胰酶消化后配制成浓度为1-10×104个/ml的细胞悬液,按1000-10000个细胞/孔接种于96孔板,每孔加100μl。
     2)将平板置37℃、5%CO2湿度培养箱中24小时后,加入含有不同浓度受试样本的培养液100μl,每个样本不同浓度设平行的三个孔,对照组加不含样本的培养液100μl,再放入培养箱中孵育24-72小时,
      3)用快速翻板法倒掉培养液,每孔加入用无血清1640按5mg/ml新鲜配制的MTT溶液100μl,温育4小时,使MTT还原为甲月替,再次倒掉上清液,每孔加DMSO(二甲基亚枫)200μl,用平板摇床摇匀后,使用酶标仪测定光密度值(OD)(参考波长450nm,检测波长570nm),以溶剂对照处理细胞为对照组。

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