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免疫磁珠 细胞分选

产品介绍

免疫磁珠 细胞分选

实验原理
免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。
免疫磁珠法分为正选法和负选法,正选法:磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞;负选法:磁珠结合不需要的细胞,游离于上清液的细胞为所需细胞。

免疫磁珠 细胞分选
实验步骤

  • 负选法:
  1. 离心收集待分离细胞,制成单细胞悬液。
  2. PBS缓冲液洗涤两次,重悬。
  3. 加入所需的一抗,4℃孵育10~15min。
  4. PBS洗涤,重悬。
  5. 加入PBS缓冲液及结合有磁珠的相应二抗,4℃孵育15min。
  6. PBS洗涤,重悬,用流式细胞分选仪,选择适当的分选程序,取阴性部分,即为所需细胞。
  • 正选法:
  1. 离心收集待分离细胞,制成单细胞悬液。
  2. PBS洗涤两次,重悬。
  3. 加入所需的一抗,4℃孵育10~15min。
  4. PBS洗涤,重悬。
  5. 加入结合有磁珠的相应二抗,4℃孵育15~20min。
  6. PBS洗涤,重悬,用流式细胞分选仪,选择适当的分选程序,收取阳性部分,即为所需的细胞。

注意事项

  1. 如果分离的细胞用作培养,全过程注意无菌操作。
  2. 由于正性分选得到的细胞表面结合有抗体及磁珠,有可能影响细胞的功能,故目前常用负性分选的方法分离细胞。如果只能用阳性分离的方法,则在分离后培养1~2天,使结合在细胞表面的抗体脱落。
  3. 抗体包被对死细胞、红细胞常有非特异性结合。故而分选前去除死细胞、红细胞(可通过Ficoll分离去除)可提高分离的效率。

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