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荧光定量 PCR检测服务

产品介绍

 荧光定量 PCR检测服务
一、 miRNA qPCR 技术服务项目
   1. 根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针
   2. 抽提DNA/RNA,逆转录RT-PCR及cDNA扩增
   3. eal-TimePCR(荧光定量PCR),进行实验结果分析  
   4.特色项目
     a、特殊物种(除人、大鼠及小鼠外)miRNA特异性引物设计(SYBR Green染料法)。本公司设计提供特异性的茎环引物,相较于传统的Olig-dT引物,结果准确率更高。
     b、miRNA 差异性表达数据分析(包括提供t-test结果、实验步骤、扩增曲线图、溶解曲线图、差异表达分析图及原始数据)。
 荧光定量 PCR检测服务
二、 miRNA qPCR 技术服务流程
   1. 样品RNA准备
   提供样品总RNA,也可提供组织、血液、细胞类样品,需支付样品的前期处理费用。
   2. RNA质量检测
   紫外吸收测定法测定波长260nm和280nm的吸收值,判断RNA样品的浓度。
   3. 逆转录合成cDNA
   利用茎凸环引物逆转录合成cDNA链。
   4. 实时荧光定量PCR
   以合成的cDNA作为模板进行实时定量PCR扩增(每个样品检测三次,同时检测每个样品中U6 snRNA或5S rRNA含量作为内参,以校正上样误差)。
   5. 分析结果、提供实验报告
   相对定量—分析相对表达参数,提供统计学分析,获得相对表达差异;
绝对定量—依据miRNA标准品制作标准曲线(每条曲线上至少设置5个数据点),以定量样品中的待检测miRNA;
分析实时定量PCR结果,提供实时定量PCR实验数据和扩增曲线,融解曲线,柱状图。

 荧光定量 PCR检测服务
三、miRNA qPCR技术服务样品提供
   a. RNA样品:取10µg总RNA,并提供RNA质量检测图。要求浓度在500ng/µl以上,体积在20µl以上,OD260/OD280的比值在1.8至2.0之间,电泳检测28s的亮度约为18s的两倍。-80℃贮存,干冰运输。
   b. 组织样品:请将200mg以上的组织样本,并分装为两管。-80℃或者液氮贮存,干冰运输。
   c. 血液样品:请提供至少2mL血样,并在2小时内处理完毕后加入Trizol。
     全血:用EDTA等抗凝剂处理后的样本,按每200µl全血加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃箱保存,干冰运输。
     血浆:用EDTA等抗凝剂处理后的样本,4℃ 4000rpm离心5分钟,上层为血浆样本,按每200µl血浆样本加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输。
     血清:用非抗凝管收集血样,静置分离上层血清,按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输。
  d. 细胞样品:
    贴壁细胞
   (1) 贴壁细胞培养或处理结束后,去除培养液;
   (2) 按每10 cm2 培养面积加1 mL Trizol试剂的比例加入Trizol试剂;摇匀,保证所有细胞接触到Trizol而被充分消化;
   (3) 用1 ml枪头反复吹打, 并将Trizol细胞悬液转移至RNAase-free 的EP管中;
   (4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存,干冰运输。
   悬浮细胞
   (1) 悬浮细胞培养或处理结束后,离心去除培养液;
   (2) 保留的细胞用PBS 缓冲液快速洗一次,离心除去PBS 缓冲液;
   (3) 按照每5×106 个细胞加1 mL Trizol的比例加入Trizol试剂,涡旋振荡使细胞充分悬浮;
   (4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存,干冰运输。

 

 

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