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分子生物学:荧光定量PCR实验技术服务

产品介绍

分子生物学:荧光定量PCR实验技术服务

荧光定量PCR分类:
一、TaqMan荧光探针

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5‘-3‘外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成同步。

分子生物学:荧光定量PCR实验技术服务
二、SYBR Green荧光染料
SYBR Green是一种DNA结合染料,能非特异地掺入到双链DNA中去。在游离状态下,它不发出荧光,但一旦结合到双链DNA中以后,便可以发出荧光。它的大优点就是可以与引物、模板相配合,用于反应体系中。从经济角度考虑,它也比其它的探针的价格要便宜得多。但由于它能与的双链DNA结合,所以一旦反应体系中出现非特异扩增,那它就会影响到定量结果的可靠性与重复性。要避免这种不利因素,可以通过选择良好的引物并优化反应条件以消除非特异性影响。

RT-qPCR主要实验步骤,是由三个步骤组成:
1.反转录:依赖反转录酶将RNA反转录成cDNDA;
2.扩增:用PCR的方法扩增cDNA;
3.检测:实时检测和定量扩增的产物.

荧光定量PCR中的一些术语:
1. CT值:荧光信号有统计意义显著增长(即穿过阈值线)时的循环次数,或者说是从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数。
2. 阈值:阈值的默认设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。
3. CT值与起始模板的量成线性关系。

客户需知:
1、请您提供新鲜的且尽量多的材料,或直接提供纯化好的总RNA或DNA(大于5ug/样本)。如是如织:100-200mg
2、请提供详细背景资料:DNA/RNA来源,丰度。

 

结果提供:
1、实验详细步骤,和相关数据。
2、标准曲线,扩增曲线,溶解曲线。
3、完整的实验报告(含软件分析结果)

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