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质粒转染

产品介绍

质粒转染

质粒转染技术原理:

转染类型:根据不同的实验目的,外源DNA导入哺乳动物细胞又可分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染一般是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到染色体,在外源DNA导入细胞1—4天后收获转染细胞对转染基因的转录和复制进行分析。而稳定转染则需要使外源基因整合于细胞染色体从而得到稳定的转染细胞株。实现细胞的稳定转染,通常需要一个抗生素筛选的过程。除DEAE葡聚糖只能用于瞬时转染,其他方法均可用于瞬时转染和稳定转染。

因为不同的细胞在生理代谢及分裂上均存在差异,因此研究者将外源遗传物质导入细胞的过程中需要选择不同的方式。目前,将外源物质导入细胞的方法主要分为三大类:1、脂质体(或是脂质体替代物)转染;2、电转;3、病毒感染。这三种方法互有优劣。脂质体或是脂质体替代物转染操作简便,价格低廉,但是对细胞毒性大。而且,有些细胞通过脂质体转染效率很低;电转操作方便快捷,但是需要专门的仪器,对细胞损伤也比较大;病毒感染克服了前两者的劣势,感染效率高,对细胞毒性小,但是病毒前期包装需要大量的时间和精力 。

实验步骤:

1. 转染试剂的准备

① 将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。

② 震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。

2. 选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体[1] 体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。

3. 将混合液在室温放置10―15分钟。

4. 吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。

5. 加入混合液,将细胞放回培养箱中培养一个小时。

6. 到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入培养基继续培养24-48小时。

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