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    MTT介绍

    点击次数:775 发布时间:2017-08-01

    MTT试剂主要有两个用途:

    1.药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培育的细胞毒性的测定;

    2.细胞增殖及细胞活性测定。

    MTT试剂原理:

    检查原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT试剂还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值,在细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。

    MTT试剂配制方法——悬浮细胞

    1、收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将补足的1640(无血清)培育基40ul Actinomycin D(有毒性)10ul用培育液稀释 (储存液100mg/ml,需预试寻找佳稀释度,1:10-1:20);需检查物10ul细胞悬液50ul(即5×104cell/孔),共100ul参入到96孔板(边缘孔用无菌水填充)。每板设对照(加100ml 1640)。

    2、置37℃5%CO2孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。

    3、每孔参入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),继续培育4 h。(悬浮细胞推荐使用WST-1,培育4 h后可跳过步骤4,直接酶联免疫检查仪OD570nm630nm校准)测量各孔的吸光值)

    4、离心(1000x10min),小心吸掉上清,每孔参入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检查仪OD570nm630nm校准)测量各孔的吸光值。

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