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    SILAC(定量蛋白质组学)的技术原理及特点

    点击次数:2225 发布时间:2015-06-16

    SILAC(定量蛋白质组学)技术原理  
        SILAC(定量蛋白质组学)的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸,细胞经5-6个倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合,经分离、纯化后进行质谱鉴定,根据一级质谱图中两个同位素型肽段的面积比较进行相对定量。属于体内代谢标记法。 
    SILAC(定量蛋白质组学)技术特点 
        SILAC(定量蛋白质组学)是体内标记技术,稳定同位素标记的氨基酸与天然氨基酸化学性质基本相同,所标记的细胞和未标记细胞在生物学行为上没有差异,标记效率可高达100%。  
        SILAC(定量蛋白质组学)采用质谱定量,定量结果准确且批次变异小、重复性好。 
        体内代谢标记与SDS-PAGE或色谱分离技术相结合,兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白,不受蛋白性质限制。 
        多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续实验对样品的影响一致,减少了实验操作和仪器设备产生的影响。 
        由于该SILAC(定量蛋白质组学)属于体内标记,标记效果稳定,其标记效率不受裂解液的影响,不仅适合于进行  全细胞蛋白的分析,还适合于膜蛋白的鉴定和定量。 
        SILAC(定量蛋白质组学)与化学标记相比,SILAC(定量蛋白质组学)方法蛋白需要量明显减少,通常每个样品只需要几十微克的蛋白量。 
        活体标记,更接近样品真实状态。  
        SILAC(定量蛋白质组学)只适用于活体培养的细胞,对于生物医学研究中常用的组织样品,体液样品等无法分析,对于动物模型的标记成本太大,无法实现。

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