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    角膜炎动物模型

    点击次数:793 发布时间:2018-03-09

    角膜炎动物模型

    1 单纯疱疹病毒性方法

    (1)复制方法  ①选用4~6周龄雌性Balb/c小鼠(体重为14~16g),经腹腔按45mg/kg体重的剂量注射戊巴比妥钠麻醉后,置于显微镜下,用1ml注射器针头交叉划伤实验鼠眼角膜上皮呈田字形,将5μl 2×100000000PFU/ml病毒(HSV-1RE株)液滴在已划伤的眼角膜表面。②体重为2.0~3.0kg的有色家兔,经兔耳缘静脉3%戊巴比妥钠注射全身麻醉(25mg/kg体重)后,置于手术显微镜下。取直径1.2mm毛细玻璃管吸取1ml病毒株液(用HSV-Ⅰ型病毒株系,采用Hela细胞培养,离心后上清液置-70℃低温冰箱内保存备用,接种时取出复温,病毒浓度为1.15×100000000PFU/ ml),一端以橡皮泥封闭。固定兔眼,在全角膜范围内共接种25个点,接种时要求玻璃管垂直于角膜面,按环钻操作法,钻切深度以突破角膜上皮层为限。

    (2)模型特点  ①模型鼠感染3d时眼角膜较1d时透明性差,出现树枝状病变,为典型改变;感染7d时角膜混浊失去透明性。②家兔眼角膜出现严重的树枝状角膜上皮炎,严重者发展为地图状角膜溃疡。

    (3)比较医学  单纯疱疹病毒性角膜炎是一种反复迁延性疾病,其发病率和致盲率均居角膜病的位。本模型制作简便、周期短,短期内可大量复制,病毒接种48h后即可开始观察,敏感性强,反应均匀一致,48h后出现典型的树枝状角膜上皮炎。通过本模型可以客观地反映药物在早期快速清除病毒抑制角膜炎症的情况,为客观准确地判断药物疗效提供了有效手段。

    2 眼损伤型细菌性方法

    (1)复制方法  体重2.0~2.5kg实验兔,饲养适应1周,实验前检查双眼无异常。用速眠新滴于兔眼0.2~0.3ml/眼,3~5min家兔眼表现局部轻度麻醉,用环钻压迫角膜无反应。先后用7mm和4mm直径角膜环钻轻轻按压角膜顺时针旋转,造成环行创伤。拉开眼睑成杯形,1ml注射器吸取2×10的12次方/L菌液(绿脓杆菌或化脓性链球菌)0.1ml滴于兔眼。

    (2)模型特点  接种细菌24h后模型动物可出现典型角膜炎症状,第1、3、5日时细菌培养均呈阳性,镜下病理组织学观察可见角膜水肿、充血,上皮细胞剥脱、溃疡,伤口未愈合,并有大量炎症细胞浸润。

    (3)比较医学  角膜无血管,其营养来源于房水、泪腺和角膜缘毛细血管。细菌性角膜炎炎症期损伤部位的上皮层及实质层细胞可释放出蛋白水解酶,导致溃疡变深和增大,眼结膜和泪腺也参与炎症反应,表现结膜红肿充血,淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞增多。泪液可冲洗结膜囊和角膜表面,泪液中含有某些抗菌性溶菌酶、免疫球蛋白具有杀菌作用。但机体修复快慢与角膜损伤深浅、细菌毒力强弱、感染细菌量多少有密切的关系。本模型选用的革兰阴性绿脓杆菌和革兰氏阳性化脓性链球菌均是眼科致病较强的细菌,该菌可产生多种溶解酶引起局部组织的降解,导致机体对细菌产生炎性反应表现角膜组织破坏甚至穿孔。本模型方法简便,容易操作,可适用于临床上眼科用抗菌药物筛选方面的研究。

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