（EAE）动物模型

反应性脑脊髓炎(EAE)动物模型

反应性脑脊髓炎动物的症状、病理改变及免疫学特征与人类的脱髓鞘疾病如：多发性硬化症(multiple sclerosis, MS)、急性播散性脑脊髓炎相似，常被看作是这类疾病的动物模型。Rivers等于1933年采用多次肌肉注射兔脑提取物的方法，次成功建立了反应脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis, EAE)模型。随后 Morgan和Kabat又把福氏佐剂(Freund adjuvant, FA)引入到EAE的建立过程中，即把抗原与福氏佐剂混合制成乳剂，单次免疫即可成功诱发EAE。这不但简化了EAE的建立过程，而且地提高了模型的可靠性。为研究MS的发病机制、治疗和预防复发创造了有利的条件。

反应性脑脊髓炎动物模型(Model of allergic encephalomyelitis in rats)

(1)复制方法  Wistar大鼠，体重为200～220g。新鲜牛脊髓60g(也可取新鲜羊脑白质200g)，去除筋膜和血管，剪碎，加入适量预冷的氯丨仿；甲醇(2：1)溶液，高速组织分散器匀浆后加氯丨仿；甲醇(2：1)溶液至620ml，4℃冰箱电动搅拌12h，用布氏漏斗加滤纸抽滤，在未抽干前加310m舍离断仿；甲醇(2：1)溶液电动搅拌2h，抽滤，如此抽滤2次。沉渣加310ml -20℃预冷丙酮搅拌2h，抽滤2次。沉渣加入620ml双蒸馏水中，电动搅拌12h，抽滤两次，沉渣溶于100ml双蒸馏水中，0.5mol/L HCl调pH至3.0，冰箱中搅拌1h，4℃1500r/min，离心60min，取上清液置透析袋中过夜。以考马斯亮蓝法测定髓鞘碱性蛋白(MBP)含量为3.2g/L，用真空冷冻干燥机将MBP的粗提品干燥，得粗品 MBP(约75mg)。

用鲍金氏培养基35℃温箱培养百日咳杆菌，5d后收集菌落，菌液58℃水浴40min灭活细菌，用比浊管比浊法测得百日咳杆菌浓度为60×10的12次方/L。MBP粗提品溶于3ml生理盐水中与3ml福氏佐剂(卡介苗含量33mg)混合成油包水乳剂，大鼠于双后足垫皮内分别注射0.3ml油包水乳剂和0.1ml百日咳杆菌。注射当天定为0d，每日称重并观察动物的神经症状。EAE的严重程度依据Knono等的标准评定。根据实验进程需要分别取不同病变时期的实验的鼠脑和脊髓组织，用10％的甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色。

(2)模型特点  实验组大鼠注射抗原后精神萎靡、食欲减退、体重逐渐下降。部分动物自第8日开始出现EAE明显症状：尾部张力下降，继而尾部张力消失。继尾部张力消失后出现单侧后肢及双侧后肢无力，继而单侧及双侧后肢瘫痪，人为翻身后不能恢复姿态，严重者四肢瘫痪，个别动物因丨病情严重而死亡。动物发病的高峰期为注射抗原后10～15d，表现为一次性急性发病过程，严重者四肢瘫痪、死亡。组织学检查光镜下可见，EAE大鼠的脑和脊髓组织中有大量炎性细胞浸润，炎性细胞聚集在血管周围呈现袖套样改变。存活者症状可逐渐缓解，体重逐渐恢复，约在注射抗原30d后可恢复。

(3)比较医学  作为MS的动物模型，EAE为MS发病机制的研究提供了便利条件。有些动物模型因丨病情严重而死亡。此模型发病率高且病情严重的原因可能有以下两方面：一是抗原MBP用量大(3mg/只)。MBP为诱发EAE的主要抗原物质，研究表明，MBP可激活体内Th1+细胞，使之穿过血脑屏障，攻击自身神经髓鞘的MBP，从而导致神经细胞脱髓鞘，引起 EAE或MS；二是采用新培养的百日咳杆菌效果好于成品的百日咳疫苗。百日咳杆菌的毒素可增加血管的通透性，使致敏的T细胞易于通过血脑屏障攻击神经髓鞘。该模型利用易获得的牛脊髓MBP的粗提品，诱导的大鼠EAE模型，发病率高，病情典型，为MS的研究提供了一个良好的模型。