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    ELISA试剂盒试验步骤详解

    点击次数:73 发布时间:2017/12/8

       ELISA试剂盒可用于测定抗原,也可用于测定抗体,ELISA试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体ELISA检测。因为其试剂不乱、易保留,操纵简便,结果判定较客观等因素,已广泛应用在免疫学检修的各领域中。

    ELISA试剂盒

      ELISA试剂盒试验步骤详解
      1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在上海恒远生物白介素ELISA试剂盒酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
      2、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
      3、配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
      洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
      4、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
      5、温育:操作同3。
      6、洗涤:操作同5。
      7、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
      8、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
      9、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
      10、计算:以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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