你真以为做ceRNA就这么简单么？

大家一直都觉得ceRNA的研究，就是研究LncRNA的简便机制了是吧。因为都不用来论证啥，就直接证明LncRNA和对应的mRNA能同时结合miRNA就行了，不是么？

其实，也不全是，当然，要是把ceRNA作为低分的LncRNA研究机制的话，那简单的就是做一个Luciferase实验：

也就是利用Luciferase的3'UTR结合miRNA，来验证一下lncRNA和mRNA是不是分别能和miRNA结合。这个都是研究miRNA的基本套路。

但LncRNA并不会表达蛋白，所以用Luciferase的方法，并不靠谱。所以就需要通过别的实验来验证。

用于ceRNA研究的常用的方法还有MS2-RIP,就是体外过表达LncRNA的时候，在末端接上一个MS2蛋白结合的串联序列，然后用MS2蛋白用RNA免疫共沉淀（RIP）的方法拉下来。当然LncRNA上会带有结合的miRNA，把拉下来的miRNA做real-time PCR就可以了。

当然，类似的方法，还有用生物素标记LncRNA的RIP，同样也是将LncRNA拉下来，然后再通过Real-time PCR来看结合上去的miRNA的表达。

其实这两种方法，都有异曲同工的作用，就是验证LncRNA与miRNA的结合。但是这两种方法，其实也不能解释mRNA是否能与LncRNA形成ceRNA的关系。于是就产生了这样的方法：

由于miRNA形成RISC复合体结合的时候，是被AGO蛋白包裹的，主要是AGO2。也就是说，拉下AGO2蛋白，就能拉下结合在上面的miRNA，这样RISC结合的LncRNA以及mRNA也会被拉下来。这就是AGO2-RIP，也就是通过拉miRNA，来分析miRNA结合的LncRNA以及mRNA的量：

用这种方法，可以相对直接地研究ceRNA之间的关系。当然，在较高分的ceRNA的研究中，这种方法也是被经常用到的。