招聘服务

Products

产品中心

  • 实验技术服务

  • 细胞株

  • Elisa试剂盒

  • 首页>技术文章>你真以为做ceRNA就这么简单么?

    技术文章 Article

    你真以为做ceRNA就这么简单么?

    点击次数:7726 发布时间:2017-11-23

    大家一直都觉得ceRNA的研究,就是研究LncRNA的简便机制了是吧。因为都不用来论证啥,就直接证明LncRNA和对应的mRNA能同时结合miRNA就行了,不是么?

    其实,也不全是,当然,要是把ceRNA作为低分的LncRNA研究机制的话,那简单的就是做一个Luciferase实验:

    也就是利用Luciferase的3'UTR结合miRNA,来验证一下lncRNA和mRNA是不是分别能和miRNA结合。这个都是研究miRNA的基本套路。

    但LncRNA并不会表达蛋白,所以用Luciferase的方法,并不靠谱。所以就需要通过别的实验来验证。

    用于ceRNA研究的常用的方法还有MS2-RIP,就是体外过表达LncRNA的时候,在末端接上一个MS2蛋白结合的串联序列,然后用MS2蛋白用RNA免疫共沉淀(RIP)的方法拉下来。当然LncRNA上会带有结合的miRNA,把拉下来的miRNA做real-time PCR就可以了。

    当然,类似的方法,还有用生物素标记LncRNA的RIP,同样也是将LncRNA拉下来,然后再通过Real-time PCR来看结合上去的miRNA的表达。

    其实这两种方法,都有异曲同工的作用,就是验证LncRNA与miRNA的结合。但是这两种方法,其实也不能解释mRNA是否能与LncRNA形成ceRNA的关系。于是就产生了这样的方法:

    由于miRNA形成RISC复合体结合的时候,是被AGO蛋白包裹的,主要是AGO2。也就是说,拉下AGO2蛋白,就能拉下结合在上面的miRNA,这样RISC结合的LncRNA以及mRNA也会被拉下来。这就是AGO2-RIP,也就是通过拉miRNA,来分析miRNA结合的LncRNA以及mRNA的量:

    用这种方法,可以相对直接地研究ceRNA之间的关系。当然,在较高分的ceRNA的研究中,这种方法也是被经常用到的。

     

     

    返回

    网站首页/关于我们

    新闻动态/技术文章

    产品中心 /荣誉与资质

    在线留言/联系我们

    JRD263蛋白组学服务

    JRD398原代细胞分离实验

    JRD272Western blot蛋白技术服务

    JRD290代谢组学价格

    联系电地:上海市长江南路180号长江软件园B区B636号

    点击这里给我发消息
     

    沪公网安备 31011302005922号