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    ELISA免疫测定,实验技巧!!

    点击次数:63 发布时间:2017/9/12

    ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。

    ELISA免疫测定目的是

    1.测定体液中的各种蛋白质,包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等;

    2.测定激素,包括小分子量的甾体激素等;

    3.测定抗生素和药物;

    4.测定病原体抗原,HBsAg、HBeAg等;

    5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体,例如抗-HBs等;

     

    ELISA免疫测定原理

    ①使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性;

    ②使抗原(或抗体)与某种酶联结成酶标 抗原(或抗体),而且此酶标抗原(或抗体)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;

    ③测定时将受检标本(抗体或抗原)和酶标抗原(或 抗体)按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开,最后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例;再加入酶反应底物后,底物被酶催化后变为有色产物,根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析,以了解被测标本中抗体或抗原含量。

     

    ELISA免疫测定步骤

    1. 包被;

    2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔);

    3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。

    4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟;

    5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml;

    6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm处,以空白对照孔调零后测各孔OD值。

    ELISA免疫测定流程图

     

    ELISA免疫测定流程图

     

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