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    高质量RNA提取条件之二

    点击次数:853 发布时间:2017-08-10

    1.选择好的RNA分离方法

    现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前简单也是安全的方法是柱式分离,如RNApure 因为操作简单,时间短,纯度高而受到大家的喜爱,RNApure不需要DNA酶消化DNA,节省了时间,避免RNA的降解,从而提高了产量;相对非柱式分离(如TRIZOL),去除蛋白及其他杂质干净,提高了纯度,对于细胞、组织、一般植物均非常适合。植物RNA的提取比较难抉择,植物RNA提取受酚、多糖、蛋白杂质、次生代谢物含量的影响,一般用TRIZOL提取纯度不高,而且很多植物用TRIZOL提取不出来。这时候可以选择多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(水仙、辣椒、胡萝卜、玉米、百合、小麦、西红柿、花菜、油菜等)和通用植物RNA提取试剂盒(适合绝大多数植物提取,包括:苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、草坪植物、松树、杉树、白桦、紫松果、彩叶草、一品红、夹竹桃、垂叶榕、紫罗兰、月季、天竺蓝、牵牛花等);非常值得一提的是血液(包括血清、血浆、脑脊液、其他液体)RNA的提取用TRIZOL和红细胞裂解的方法效果都不好,红细胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分,这个过程RNA很容易降解,推荐使用TRIpure LS 或者血液总RNA提取试剂盒。

    2.消除环境RNase的污染

    为了得到完整的、高品质RNA,在整个RNA制备过程中,当RNA离开强蛋白变性剂(如离液裂解液或酚)的保护时,避免引入新的RNase污染就非常关键。由于RNase存在,所以与纯化的RNA接触的每一样东西都是无RNase污染的。的表面,包括移液器、工作台、玻璃器皿和制胶设备,都用表面去污净化溶液如RNase喷雾清除剂 来处理过,去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的RNase污染,可以用RNAsafe。一直使用无RNase的枪头、试管和阿溶液,手套也应经常更换。

     3.提取好的RNA如何储存

    如果只是短期储存,重悬的RNA应放置于-20°C;如果是长期储存的话,就应该放置于-80°C。尽管重悬于水或缓冲液中的RNA也可以储存在-80°C,但保存RNAlong中的RNA沉淀则更加稳定,可以长期保存。我们推荐将RNA溶液分装在几支管中。这会避免反复冻融损伤RNA,并预防偶然的RNase污染。

    4.使用正确的细胞或组织储存条件

    在样品用液氮瞬间冻结之后,应该储存在-80°C,千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻,也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该先在超低温条件下先研磨成粉,然后置于裂解液中进行匀浆。

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