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    结缔组织类细胞培养

    点击次数:618 发布时间:2017-07-27

    一、成纤维细胞培养

    用人或动物胚体为好;动物可用小鼠或鸡胚,去头和内脏,剪成小碎块后,用胰蛋白酶消化法培养;如为人胚,可取皮肤培养。幼儿包皮是培养成纤维细胞的很好对象。

    二、巨噬细胞培养

    1.实验前三天,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml(勿注入肠内)。

    2.引颈杀死动物,手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3~5秒。

    3.置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁。

    4.再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同时从两侧用手指揉压腹膜壁,令液体在腹腔内充分流动。

    5.用针头轻轻挑起腹壁,使动物体微倾向一侧,使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。

    6.小心拔出针头,把液体注入离心管中,250g 4℃离心10分钟,去上清,加10 ml Eagle培养基。

    7.计数细胞,每只小鼠可产生20~30×105细胞,其中90%为巨噬细胞。

    8.为获取3×105个帖附细胞/平方厘米,需接种2.5×106/ml。

    9.为纯化培养细胞,去除其它白细胞,在细胞培养接种数小时后,去除培养液,用Eagle液冲洗1~2次后,再加新Eagle培养液置37℃ CO2温箱中培养。

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