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    ELISA试剂盒常见问题及简单处理方法

    点击次数:776 发布时间:2017-06-26

       ELISA试剂盒可用作标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。
      目前ELISA试剂盒的使用不仅是在科研和医疗上,一般的家庭也会购买用于检测一些日常疾病。并且由于国产ELISA试剂盒的特异性和灵敏性高不断提高,在日后ELISA试剂盒会越来越普及的。不过对于普通的百姓来说,无论使用国产ELISA试剂盒还是进口ELISA试剂盒都会出现一些问题,那么在遇见这些问题的时候应该怎么解决呢?以下是一些比较常见的问题:
      1、试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。
      2、加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法好是先放在常温中1到2小时,然后在进行离心处理
      3、洗板时容易造成误差:因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以好多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动
      4、显色问题:使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况
      5、终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒可
      6、读板:读板的时候先应该板的清洁干净。
      ELISA试剂盒应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。

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