ELISA试剂盒检测不成功的原因

更新时间：2017-06-26

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　　ELISA试剂盒即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。由于ELISA方法灵敏，特异性强不需要特殊设备，所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性）如标本的影响为大家解读ELISA检测的影响因素。
溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素），在洗涤过程中往往难以洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧（O），从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性［2］。所以严重溶血标本禁用。
标本受细菌污染。因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
标本保存不当。在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性；为克服上述干扰，ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。
塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。好使用真空采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。
标本凝固不全。在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；因此血液标本采集后使其充分凝固后再分。

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